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化学发光试剂盒的使用方法有哪些...

化学发光试剂盒的使用方法有哪些?

发布日期:2022-07-07 作者: 点击:

化学发光试剂盒的使用方法有哪些?


化学发光试剂盒是一种超敏ECL化学发光试剂盒,本产品与二抗上偶联的辣根过氧化物酶发生化学反应,发出萤光,从而可以通过用X光片压片或其它适当化学发光成像设备检测样品。

ECL化学发光试剂盒是用于检测HRP或其标记产物的化学发光试剂,可用于western blot或ELISA等实验的检测。分为普通型ECL化学发光试剂盒(高质量鲁米诺底物,检测灵敏度10-100pg HRP)和增强型ECL化学发光试剂盒(采用更稳定、发光量子产率更高的反应底物,检测灵敏度1pg HRP)。两款试剂盒发光强度均可以稳定持续30min以上。

化学发光试剂

化学发光试剂盒

原理:

超敏型ECL化学发光底物试剂盒用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶(HRP)的抗体、抗原或者核酸。蛋白质或核酸在电泳后转移到印迹膜上,以HRP标记的抗体或探针结合膜上的目的蛋白或核酸,洗膜后置于用本产品配制的ECL工作液中,室温孵育数分钟,HRP使工作液中的鲁米诺(Luminol)氧化并发光,试剂中添加的增强剂可以使得这种发光大大增强。此光经X光胶片或者电子装置感光记录下来,可清晰显示蛋白质或核酸条带。

使用方法:

1.印迹膜制备:执行常规电泳、转膜、HRP标记的抗体或者HRP标记的核酸探针孵育、洗膜;ECL工作液含有HRP催化的发光底物,检测系统必须基于HRP酶标记的抗体或者核酸探针。充分的洗涤对于降低背景非常重要,所有步骤均在室温下完成。

2.ECL工作液的配置:在使用前取等量A液和B液,混合均匀并尽快使用;将膜片置混合液中,于室温下孵育约1分钟,每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2 ml以覆盖全膜片,注意不要在膜片表面形成气泡。

3.蛋白或核酸信号显现:

1).用平头镊钳住膜片,垂直置于吸水纸上以吸去过量试剂,仅留下少量液体覆盖表面,不可让膜完全干燥;

2).将膜片置于保鲜膜上,吸附蛋白面朝上,小心赶尽气泡;

3).用电子装置感光,或在暗室中用X光片曝光;

4).根据信号强弱适当调整曝光时间,也可选择不同时间多次曝光,以取得更佳效果。

本文网址:http://www.maincare.cn/news/895.html

关键词:化学发光试剂

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