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化学发光试剂注意事项,允许步骤2-5在日光灯下进行方便操作,但在强光下操作时间拖得太长,灵敏度可能会有一定程度降低,移到暗房操作可避免之.戴手套可以避免在膜上留下手印.长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系.与工作液孵育1-5分钟后膜上的条带发光.强条带发光在暗房中肉眼可见,低丰度蛋白条带可能发光较弱,但仍可成功进行X光胶片曝光.不能简单以肉眼观察判断条带发光时间.荧光可持续10小时以上,条带弱时可延长曝光至1-10个小时.
化学发光试剂由于超敏发光液及其灵敏,对大多数来源的进口抗体我们强烈推荐抗体的起始浓度为一抗1:1000，二抗1:2000。通常为一抗1:2000二抗1:4000或更加稀释。 抗体浓度过高将造成高背景或没有条带,导致失败.某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜.使用预染色蛋白Marker和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定条带位置和大小.
化学发光试剂实验前,先将实验中所需的所有试剂及待测样品从冰箱中取出,待温度与室温（25℃）平衡1小时以上后使用.加样前应将所用试剂和待测样本分别充分混匀.酶结合物和抗体混匀时,切忌产生大量气泡.实验中用于冻干品复溶和稀释浓缩洗涤液所用的蒸馏水或去离子水应保证质量.冻干品加入蒸馏水或去离子水后,应盖上胶塞后静置，待固体物质完全溶解后，再将试剂瓶反扣在实验台上，让附着在瓶盖上的固体物质溶解，然后充分混匀后待用.
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